高效液相色谱仪各组成部分的事情特点
2014-11-18
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高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、疏散系统、检测系统和数据处置惩罚系统 ，下面将划分叙述其各自的组成与特点。
1．进样系统
一样平常接纳隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作 ，进样量是恒定的。这对提高剖析样品的重复性是有益的。
2．输液系统
该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一样平常压强为l．47～4．4X107Pa ，流速可调且稳固 ，当高压流动相通过层析柱时 ，可降低样品在柱中的扩散效应 ，可加速其在柱中的移动速率 ，这对提高区分率、接纳样品、坚持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错和梯度仪 ，可使流动相随牢靠相和样品的性子而改变 ，包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值 ，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使种种物质（纵然仅有一个基团的差别或是同分异构体）都能获得有用疏散。
3.疏散系统
该系统包括色谱柱、毗连受和恒温器等。色谱柱一样平常长度为10～50cm（需要两根连用时 ，可在二者之间加一毗连受） ，内径为2～5mm ，由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等质料制成 ，住内装有直径为5～10μm粒度的牢靠相（由基质和牢靠液组成）．牢靠相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶组成 ，它们都有惰性（如硅胶外貌的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔径可达1000?）和比外貌积大的特点 ，加之其外貌经由机械涂渍（与气相色谱中牢靠相的制备一样） ，或者用化学法偶联种种基因（如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或种种长度碳链的烷基等）或配体的有机化合物。因此 ，这类牢靠相对结构差别的物质有优异的选择性。例如 ，在多孔性硅胶外貌偶联豌豆凝集素（PSA）后 ，就可以把成纤维细胞中的一种糖卵白疏散出来。
另外 ，牢靠相基质粒小 ，柱床极易抵达匀称、致密状态 ，极易降低涡流扩散效应� ；柿６刃� ，微孔浅 ，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高区分率是有益的。凭证柱效理论剖析 ，基质粒度小 ，塔板理论数N就越大。这也进一步证实基质粒度小 ，会提高区分率的原理。
再者 ，高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C ，通过改善传质速率 ，缩短剖析时间 ，就可增添层析柱的效率。
4．检测系统
高效液相色谱仪常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种。
（1）紫外检测器
该检测器适用于对紫外光（或可见光）有吸收性能样品的检测。其特点：使用面广（如卵白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用） ；迅速度高（检测下限为10-10g／ml） ；线性规模宽 ；对温度和流速转变不敏感 ；可检测梯度溶液洗脱的样品。
（2）示差折光检测器
凡具有与流动相折光率差别的样品组分 ，均可使用示差折光检测器检测。现在 ，糖类化合物的检测大多使用此检测系统。这一系统通用性强、操作简朴 ，但迅速度低（检测下限为10-7g／ml） ，流动相的转变会引起折光率的转变 ，因此 ，它既不适用于痕量剖析 ，也不适用于梯度洗脱样品的检测。
（3）荧光检测器
凡具有荧光的物质 ，在一定条件下 ，其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。因此 ，这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物（如多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些卵白质等）的测定 ，其迅速度很高（检测下限为10-12～10-14g／ml） ，痕量剖析和梯度洗脱作品的检测均可接纳。
5.数据处置惩罚系统
该系统可对测试数据举行收罗、贮存、显示、打印和处置惩罚等操作 ，使样品的疏散、制备或判断事情能准确开展。
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